几种天然抗氧化剂对DNA的保护作用 茶多酚银杏竹叶

王兴

《浙江大学》 2001年

几种天然抗氧化剂对DNA的保护作用及其分子放射生物学机制的研究

徐兵  

【摘要】： 作为生物遗传信息贮存的中心——DNA，控制着细胞的增殖与分化， 其重要性对生物体是不言而喻的。然而多种理化因素都能造成DNA的损 伤，尤以自由基所导致的损伤最为普遍、严重。因此，寻找能清除自由基 从而对DNA损伤有保护作用的物质特别是功能植物材料——天然抗氧化 剂，具有重要的意义。 本文主要以茶多酚、银杏提取物、竹叶提取物等几种天然抗氧化剂为 研究材料，通过超微弱化学发光分析和荧光光度分析等实验手段，对~(60)Co- γ辐照和CuSO_4—Phen—V_C—H_2O_2—DNA体系中的OH°所致DNA损伤 的保护作用作了比较系统的研究，获得了一些新的结果。 结果表明： （1）茶多酚、银杏提取物、竹叶提取物均具有清除OH°、O_2~(-°)自由基 的作用。以茶多酚清除OH°的能力最强，其IC_(50)为1.049mg/ml；银杏 提取物次之，IC_(50)为1.433mg/ml；竹叶相对最弱，IC_(50)为1.554mg/ml。 清除O_2~(-°)能力也以茶多酚为最强，其IC_(50)为3.079ug/ml；银杏提取物次 之，为3.425ug/ml；竹叶提取物最弱，为3.593ug/ml。 （2）茶多酚、银杏提取物和竹叶提取物浓度的增加对EB-DNA体系 的荧光强度的抑制率也升高，且有线性关系；浓度为1.25mg/ml的茶多酚 荧光强度抑制率约为0.902，同一浓度的银杏提取物抑制率约为0.821，竹 叶提取物约为0.814。荧光强度抑制率为50％的三种抗氧化剂的浓度较为 接近，均约为0.5mg/ml。结果表明三种抗氧化剂与DNA相互作用关系均 相类似。 茶多酚、银杏提取物、竹叶提取物的荧光抑制率随浓度的变化有线性 关系，不存在饱和性，且抑制率可达95％以上。而多糖的荧光抑制率具有 饱和性，且抑制率相对很低，螺旋藻多糖、海藻多糖1、海藻多糖2对荧 光强度的饱和抑制率分别为0.166，0.261，0.326。表明此两类物质与 EB-DNA体系的DNA有不同的作用机制模式。 生物物理学硕士学位论文 摘要 门）三种抗氧化剂对 DNA辐射损伤都具有保护作用。在我们的实验 浓度范围内茶多酚、银杏提取物、竹叶提取物对 0～20Gy的 6七小y照射 剂量下的DN A辐射损伤，均有保护作用：且随着抗氧化剂浓度的升高， 其保护作用增强。 茶多酚对加C小 Y辐照所致的 DNA损伤保护作用比银杏提取物和竹叶 提取物更强，而后两者保护作用差别不是很大，银杏提取物的作用稍强于 竹叶提取物。 （4）茶多酚、银杏提取物、竹叶提取物均同时具有预防型抗氧化剂和 断链型抗氧化剂的双重功能，既能使 CuSO。－－－－－－chen－－－－Vc－s。O。一DNA体 系动力学曲线发光峰值下降，又能使后峰出现时间延迟。前峰、后峰峰值 有明显下降，其IC50约在0．Zllg／ml。前峰峰值出现时间几乎不受这三种抗 氧化剂的影响，在本实验条件下，均约为 100秒。而后峰峰值出现的时间 则有所延迟，且随抗氧化剂浓度的增加，时间延迟明显变长，迟至时间一 倍时的浓度也为0二fig／ml。 茶多酚、银杏提取物。竹叶提取物三者对本体系发光动力学曲线的影 响有所不同。前后发光峰值抑止率以茶多酚的影响最大，银杏提取物次之， 竹叶提取物相对最小。后峰出现的时间也是以茶多酚为最迟，竹叶提取物 为最短。 （5）三种抗氧化剂清除自由基能力与它们对DNA损伤的保护作用成 一定的对应关系，即清除自由基能力最强的茶多酚对DNA损伤的保护作 用最强，清除自由基能力次之的银杏提取物对DNA损伤的保护作用次之， 清除自由基能力最弱的竹叶提取物对DNA损伤的保护作用则最弱。
【关键词】：DNA 自由基 茶多酚 银杏提取物 竹叶提取物 化学发光 荧光探针
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：Q345.7
【目录】：
致谢3-6
中文摘要6-8
前言8-9
第1章 文献综述9-25
1．1． 抗氧化剂与自由基概述9-10
1．2． 自由基对生物大分子损伤的研究进展10-14
1．2．1． 自由基对DNA的损伤10-13
1．2．2． 自由基对蛋白质的损伤13
1．2．3． 自由基对细胞膜的损伤13-14
1．2．4． 自由基对其它生物大分子的损伤14
1．3 微弱发光分析在测定清除自由基及对DNA损伤保护作用中的应用和进展14-17
1．3．1 微弱发光测量原理15
1．3．2 DNA损伤的微弱发光分析测定15-17
1．4 茶多酚、银杏提取物、竹叶提取物及某些藻类多糖研究进展17-25
1．4．1 目前研究的中草药天然抗氧化剂17-18
1．4．2 茶多酚18
1．4．3 银杏提取物18-20
1．4．4 竹叶提取物20-21
1．4．5 生物学活性21-24
1．4．6 藻类多糖24-25
第2章 研究材料、方法与手段25-29
2．1 研究材料25
2．2 试剂与仪器25-26
2．3 方法与手段26-29
2．3．1 抗氧化剂清除OH°的测定方法——CuSO_4—V_C—H_2O_2—酵母悬浮液体系化学发光检测法26
2．3．2 抗氧化剂清除O_2~（-°）的测定方法——次黄嘌呤—黄嘌呤氧化酶—鲁米诺体系化学发光检测法26-27
2．3．3 三种抗氧化剂与DNA作用的测定方法—EB-DNA体系荧光强度检测法27
2．3．4 抗氧化剂对DNA损伤的保护作用的超微弱发光检测法27
2．3．5 ~（60）Co-γ辐照27-29
第3章 实验结果与分析29-60
3．1 茶多酚、银杏提取物、竹叶提取物清除自由基的作用29-33
3．1．1 清除OH°中三种抗氧化剂浓度（C）与抑制率（Ⅰ）的关系29-30
3．1．2 清除O_2~（-°）中三种抗氧化剂浓度（C）与抑制率（Ⅰ）的关系30-33
3．2． EB荧光探针研究两类物质与DNA的作用33-42
3．2．1 茶多酚对EB-DNA系统荧光特性的影响33-34
3．2．2 银杏提取物对EB-DNA系统荧光特性的影响34-35
3．3．3 竹叶提取物与DNA相互作用后对EB荧光强度的抑制率35-36
3．2．4 螺旋藻多糖与DNA相互作用后对EB荧光强度的抑制率36-37
3．2．5 海藻多糖1与DNA相互作用后对EB荧光强度的抑制率37-38
3．2．6 海藻多糖2与DNA相互作用后对EB荧光强度的抑制率38-42
3．3． 三种抗氧化剂对DNA辐射损伤的保护作用的研究42-49
3．3．1 不同剂量γ辐照对EB-DNA荧光特性的影响42-43
3．3．2 茶多酚、银杏提取物、竹叶提取物不同浓度处理下对辐照EB-DNA荧光特性的影响43-49
3．4 几种抗氧化剂对CuSO4—Phen—VC—H_2O_2—DNA化学发光体系动力学曲线的影响49-60
3．4．1 温度对CuSO4—Phen—VC—H_2O_2—DNA化学发光体系动力学曲线影响49-51
3．4．2 茶多酚浓度对化学发光动力学曲线影响51-52
3．4．3 银杏提取物浓度对化学发光动力学曲线影响52-54
3．4．4 竹叶提取物浓度对化学发光动力学曲线影响54-55
3．4．5 结论55-58
3．4．6 讨论58-60
第4章 结语60-63
4．1 茶多酚、银杏提取物、竹叶提取物具有清除自由基的作用60
4．2 三种抗氧化剂与DNA的作用关系60
4．3 三种抗氧化剂对DNA辐射损伤具有保护作用60-61
4．4 三种抗氧化剂对CuSO4—Phen—VC—H_2O_2—DNA化学发光体系动力学曲线的影响61
4．5 三种抗氧化剂清除自由基能力与对DNA辐射损伤保护作用的关系61-63
参考文献63-66
英文摘要（abstract）66-67

http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-10335-2001000214.htm